趨化因子試劑盒是一種用于檢測趨化因子含量的專業(yè)工具，在生命科學(xué)研究和臨床診斷中具有重要意義。趨化因子是一類能夠引導(dǎo)細(xì)胞定向遷移的小細(xì)胞因子或信號蛋白，通過與趨化因子受體的結(jié)合，調(diào)控免疫細(xì)胞的遷移和定位，參與炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答和組織修復(fù)等生理過程。
趨化因子試劑盒基于酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）等原理，利用雙抗體夾心法等技術(shù)，能夠特異性地檢測樣本中的趨化因子水平。試劑盒中通常包含固相抗體、酶標(biāo)記抗體、標(biāo)準(zhǔn)品、顯色底物等關(guān)鍵組分，通過一系列溫育、洗滌和顯色步驟，最終利用酶標(biāo)儀測定吸光度，從而計算出樣本中趨化因子的濃度。
1、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋
凍干標(biāo)準(zhǔn)品需用說明書指定的稀釋液（如樣本稀釋液）復(fù)溶，靜置10~15分鐘（避免劇烈震蕩），確保完q溶解。
按梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品（如從高濃度到低濃度，依次為1000pg/mL、500pg/mL、250pg/mL等），每一步稀釋需充分混勻（用移液器吹吸5~10次），避免濃度梯度誤差。
稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品需在2小時內(nèi)使用，未用完部分按保存要求處理（見“保存方法”）。
2、加樣操作
酶標(biāo)板布局：提前設(shè)計孔位（如標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔、空白孔、對照孔），記錄每孔對應(yīng)的樣本編號，避免混淆。
加樣量精準(zhǔn)：嚴(yán)格按照說明書要求加樣（如標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50μL、檢測抗體50μL等），加樣時吸頭尖d避免接觸孔壁或液面，防止交叉污染；若有液體濺出，需用吸水紙吸干并消毒。
避免氣泡：加樣后若孔內(nèi)出現(xiàn)氣泡，需用吸頭輕輕刺破，否則會干擾酶標(biāo)儀讀數(shù)。
3、孵育控制
溫度與時間：孵育溫度（如37℃或室溫）和時間（如60分鐘、90分鐘）需嚴(yán)格遵循說明書，建議使用恒溫孵育箱（避免用室溫自然孵育，溫度波動大），孵育時用封口膜密封酶標(biāo)板，防止液體蒸發(fā)或污染。
避光孵育：若檢測抗體或酶結(jié)合物對光敏感（如說明書標(biāo)注），孵育時需用鋁箔包裹酶標(biāo)板。
4、洗滌步驟
洗滌是減少背景值的關(guān)鍵步驟，需使用稀釋后的洗滌液，每孔加液量需充足（如300μL/孔），確保孔內(nèi)液體完q覆蓋包被面。
洗滌次數(shù)嚴(yán)格按說明書（通常4~6次），每次洗滌后需將酶標(biāo)板在吸水紙上用力拍干（避免殘留液體影響顯色），但不可用力過猛導(dǎo)致孔內(nèi)涂層脫落。
自動洗板機(jī)使用前需校準(zhǔn)，手動洗板時避免洗滌液溢出至相鄰孔。
5、顯色與終止
顯色液需現(xiàn)配現(xiàn)用（若為A、B液混合），加樣后輕輕震蕩酶標(biāo)板（30秒），確保顯色液均勻分布，然后避光孵育（如37℃、15~30分鐘），密切觀察顯色情況（標(biāo)準(zhǔn)品孔應(yīng)出現(xiàn)明顯梯度顏色，空白孔無色或極淺）。
終止液（如2M H?SO?）具有腐蝕性，加樣時需小心，按順序逐孔加入（避免前后時間差過大），加完后輕輕混勻，此時顏色會由藍(lán)變黃（若用TMB底物）。
終止后需在10~30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀讀數(shù)，超過時間可能導(dǎo)致吸光度值下降。
您的位置：
更新時間：2025-07-29 
瀏覽次數(shù)：641
在線咨詢
返回頂部